出访团组名称

刘珞等1人赴德国、比利时会议团组

出访人团组成员

部门

职务

刘珞

生命科学与技术学院

副教授

出访国家或地区

德国、比利时

拟出访日期

2019.10.27-2019.11.13

邀请单位

劳特林根大学知识基金会Daniel Geigis主席教授，亚琛工业大学Ulrich Schwaneberg 教授，海德堡马克思普朗克医学研究所Joachim Spatz教授的比利时鲁汶大学Raf Dewil教授

经费来源及

拟支出金额

经费来源：高精尖21530001001

拟支出金额：38745元

出访任务

及日程安排

2019年10月27日    从北京首都国际机场乘机经由法兰克福中转飞往斯图加特，乘车至劳特林根。

2019年10月28日    上午：“生物技术与生物功能材料”会议开幕式及大会报告，生物技术进展及趋势专题报告，听取南京工业大学姜珉教授有关生物法合成丁二酸的报告

    下午：合成气利用及壹碳发酵的专题报告，听取卡尔斯鲁厄理工学院Karin教授合成气发酵制备乙醇的报告

2019年10月29日    上午：听取生物材料报告，刘珞做《多酶级联催化合成大环內酯》的报告，听取Rumen教授生物材料涂层包埋在酶固定化方向的研究

    下午：听取生物高分子、生物表面活性剂生物合成及应用的报告，整理近期发布的中德、中欧合作项目指南，讨论申报合作研究课题。

2019年10月30日    上午：访问劳特林根大学生物医学材料实验室，观摩3D打印技术在生物医学材料加工中的应用，与劳特林根大学Rumen Krastev交流生物医学材料中德合作项目研究进展情况，及筹备11月底在北京召开项目启动会，并讨论下一步实验安排

    下午：乘火车前往亚琛

2019年10月31日    上午：与Ulrich Schwaneberg教授交流，讨论两个课题组之间正在进行的中德合作项目“二氧化碳生物多酶还原体系的设计和组装”项目（国家自然科学基金批准号21861132017）的各自分工和进展，及后续实验安排

    下午：与本人在该实验室留学的研究生孟帅奇同学讨论P450单加氧酶课题进展，及下一步试验计划

2019年11月1日 氢化酶是此合作项目重点研究内容，为中方的二氧化碳固定提供还原力，接下来一周的时间将在实验室开展相关研究工作

上午：配置LB培养基，用于培养大肠杆菌。采用高压湿热法对培养基进行灭菌。同时配制后续试验所需的抗生素及其他相关试剂，保存备用。

    下午：采用化学转化法，将两套氢化酶质粒分别转化到大肠杆菌克隆宿主TOP 10中。将转入质粒的TOP 10菌株涂布到带有相应抗生素的LB琼脂平板上，放在恒温培养箱内过夜培养，进行筛选。

2019年11月2日 上午：从平板上挑取单克隆菌落，加入到带有相应抗生素的LB液体培养基中，置于摇床中震荡培养6个小时，繁殖足够数量的大肠杆菌，用于提取质粒。

    下午：离心，收集菌体。使用质粒提取试剂盒提取氢化酶质粒。利用琼脂糖凝胶电泳技术，检测提取出的质粒DNA的长度及纯度。将结果正确的质粒DNA保存在-20℃冰箱中。

2019年11月3日 上午：用CaCl2法制备用于化学转化的大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞。制备好的感受态细胞于液氮中速冻后，保存在-80℃冰箱里，用于后续质粒的转化。

    下午：采用化学转化法，将第一套氢化酶质粒转化到大肠杆菌表达宿主BL21 (DE3)中。将转入质粒的BL21 (DE3)菌株涂布到带有相应抗生素的LB琼脂平板上，放在恒温培养箱内过夜培养，进行筛选。

2019年11月4日 上午：从平板上挑取单克隆菌落，加入到带有相应抗生素的LB液体培养基中。培养3~4个小时后，用CaCl2试剂处理菌体，制备含有第一套氢化酶质粒的大肠杆菌表达宿主BL21 (DE3)感受态细胞，用于第二套氢化酶质粒的转化。

    下午：将第二套氢化酶质粒用化学法转入含有第一套氢化酶质粒的大肠杆菌表达宿主BL21 (DE3)中。将转入两套氢化酶质粒的BL21 (DE3)菌株涂布到带有相应抗生素的LB琼脂平板上，放在恒温培养箱内过夜培养，再次进行筛选。

2019年11月5日 上午：从平板上挑取含有两套氢化酶质粒的阳性克隆子，加入到带有相应抗生素的LB液体培养基（试管）中，培养3~4个小时，活化大肠杆菌。

    下午：将试管中活化后的大肠杆菌转接到摇瓶中培养，4个小时后加诱导剂IPTG进行诱导，过夜培养，使氢化酶充分表达。

2019年11月6日 上午：离心收集表达后的大肠杆菌菌体，用磷酸盐缓冲液洗涤细胞，超声破壁，收集破碎后的上清悬液。同时配制十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶，用于检测蛋白表达情况。

    下午：用配制好的SDS-PAGE凝胶检测大肠杆菌破碎后的上清悬液。凝胶用考马斯亮蓝染色剂染色1小时，随后用脱色剂洗去多余的考马斯亮蓝，观察两套氢化酶蛋白在大肠杆菌中表达的效果。

2019年11月7日 上午：乘汽车前往比利时鲁汶大学访问，做题为《多酶级联催化合成大环內酯》的报告，交流生物质利用，及生物基材料的最新进展

    下午：在鲁汶大学进一步交流，考察可再生能源设备，探讨利用光热能源处理生物质以制备生物油的方法，进行潜在合作课题的讨论。结束后坐车返回亚琛。

2019年11月8日 上午：设计并配置反应体系，使用分光光度法测试氢化酶的酶活。收集并整理数据，分析氢化酶提供还原力从而固定二氧化碳的能力。

    下午：根据酶活测试实验结果，评估两套氢化酶用于“二氧化碳生物多酶还原体系的设计和组装”的可行性。与Ulrich Schwaneberg教授进一步商讨下一步的计划，及后续实验安排与分工。

2019年11月9日 乘车前往海德堡

2019年11月10日    上午：学术交流，做题为《多酶级联催化合成大环內酯》的报告，介绍细胞色素P450单加氧酶催化机理，理性改造策略，及其如何实现脂肪酸定向切割的机制

    下午：讨论大环內酯类分子在细胞内抗菌及代谢机制，以及大环內酯对细胞生长因子的影响，及其对细胞生长的作用，以及如何使用酶催化策略，合成特定的大环內酯化合物分子

2019年11月11日    上午：Spatz教授介绍其课题组在细胞生理、生物物理相关研究的最新进展，代谢调控对上皮细胞迁移的作用规律，以及微流体对合成细胞稳定性的影响

    下午：与Kemkemer教授交流，交流微流控芯片在酶工程催化动力学，微流控生物检测芯片，以及微流控在高通量筛选领域的进展，探讨相关的合作研究项目

2019年11月12日    经由法兰克福乘机返回

2019年11月13日    抵达北京

事后公示

请在回国后1个月内在单位内部公布上述公示内容的实际执行情况和出访报告。

公示期7天，如有异议，请于9月30 日下午5:00前请将书面意见反馈至国际交流与合作处，联系电话：010-64448919；邮箱ygcf@mail.buct.edu.cn